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發(fā)布時(shí)間:2019-08-13 閱讀407次
俗話說(shuō),“豬糧安天下”,生豬產(chǎn)業(yè)是關(guān)系國(guó)計(jì)民生的重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)。經(jīng)過(guò)一年的努力,目前我國(guó)非洲豬瘟疫情勢(shì)頭總體減緩,養(yǎng)豬場(chǎng)戶(hù)信心逐步增強(qiáng),接下來(lái)將以非洲豬瘟疫情防控和恢復(fù)生豬生產(chǎn)為重點(diǎn)任務(wù)。而在非洲豬瘟疫情防控、非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的過(guò)程中,低速離心機(jī)等檢測(cè)儀器設(shè)備將受到高度的關(guān)注。
在非洲豬瘟低速離心機(jī)的使用過(guò)程中,如何正確操作是關(guān)鍵。對(duì)此,湖南可成對(duì)檢驗(yàn)新型非洲豬瘟的操作步驟,包括檢測(cè)前準(zhǔn)備工作、實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材、新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀樣本處理及要求、新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀操作步驟進(jìn)行了解答。
湖南可成低速離心機(jī)標(biāo)配1.5/2.2ml×24轉(zhuǎn)子
檢測(cè)前準(zhǔn)備工作
請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀試劑盒,平衡至室溫。
從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液??蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4℃。
3、需要做20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材
1.新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀(450nm)
1.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.準(zhǔn)備37℃恒溫箱或水浴鍋
4.蒸餾水或去離子水
新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀樣本處理及要求
血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,低速離心機(jī)離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL。
待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL,樣本稀釋液40μL。
隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光水浴鍋孵育15min。
每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
以上就是“低速離心機(jī)如何檢驗(yàn)新型非洲豬瘟”的介紹,想要了解更多冷凍離心機(jī)的相關(guān)資訊,歡迎咨詢(xún)可成儀器。
關(guān)鍵詞:低速離心機(jī)
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